食品衛生檢驗中沙門菌屬LAMP檢測方法的應用效果分析
Loop-mediated isothermal amplification 縮寫為LAMP， 環介導等溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一門新興的基因擴增技術,作為一種分子生物學檢測技術,具有高特異性、高敏感性、簡單、便捷及成本低的特點,已廣泛用于臨床疾病的診斷、流行性細菌或病毒的定性定量檢測、動物胚胎性別鑒定及基因芯片開發等領域。
摘要：目的：分析沙門菌屬LAMP在食品衛生檢驗中的應用效果。方法：擇取2015年2月-11月的食品標本142份，通過LAMP以及分離培養法對其進行檢測與鑒定，對比兩組檢測結果。結果：通過LAMP檢測所得結果中，陽性率顯著優于分類培養鑒定結果，數據差異存在統計學意義(P<0、05);應用LAMP進行檢驗，可以通過加熒光染料染色法判斷結果;LAMP檢測時間不超過24h，而分離培養鑒定時間在4d-7d左右。結論：應用LAMP法對食品進行檢測，不僅具有較高的沙門菌屬陽性率，而且檢測周期較短，實際應用價值顯著，值得廣泛推廣。
關鍵詞：食品衛生檢驗 LAMP檢測方法 應用效果 沙門菌屬
沙門菌是誘發人體種類細菌性食物中毒的主要因素�，F階段，檢測沙門菌的主要方法為分類培養法，該方法雖然具有較好的準確性，但操作程序十分繁瑣，免疫學法并不具較好的敏感度，而PCR雖然具有較高的敏感度以及特異度，但在設備方面具有較高的要求，推廣限制較大。LAMP屬于新興核酸擴增法，具有特異性強、快速以及簡單等優勢。本次試驗主要通過對比分析分類培養法與LAMP法在食品沙門菌屬方面的檢測效果，進而探析LAMP法的應用價值。
一、資料與方法
1、一般資料
擇取2015年2月-11月的食品標本142份，其中，有6分生食類蔬菜、8份鮮榨果汁、8份沙拉、10份冰激凌、10份生水產品、20份速凍米面、20份非發酵豆制品、20份熟肉、20份生鮮肉以及20份冷凍生肉。以腸炎沙門菌為參考菌株。
2、檢測方法
取25g食品標本置于無菌均質袋內，以拍擊式均質器進行拍打，2min后停止，將其置于37℃環境中培養10h，冷凍食品置于45℃環境中解凍15min。
對標本行分離培養法檢測：在10mlTTB增菌液中接種1ml增菌后標本，然后置于42℃中對其進行培養，時長為24h。另在101mlSC增菌液中接種1ml增菌后標本，在37℃環境中培養4h。各取1杯增菌液，分別進行XLD平板與BS平板接種，于37℃環境中培養24h。擇取3個可疑菌落，進行賴氨酸脫羧酶試驗培養基、營養瓊脂平板以及TSI接種，于37℃環境中培養24h。如果生化反應與沙門菌特征相符，取出營養瓊脂平板中的可疑菌落，通過生理鹽水，配制為菌懸液，然后通過微生物鑒定系統進行分析。如果XLD平板、BS平板中不存在可疑菌落，繼續將BS平板置于37℃環境中培養24h，如檢測仍不存在可疑菌落，則為陰性。
對標本進行LAMP檢測：取1ml標本前增菌液，對其進行離心處理，離心率為每分鐘10000r，共2min，排除上清提取核酸;另取上清液1l，制成DNA待檢模板，對食品標本進行DNA檢測，反應后，通過肉眼觀察反應液顏色，如果呈現綠色，則為陽性;如果呈棕色，或是無色，則為陰性。
3、觀察指標
觀察兩種檢測方法的陽性率。
4、統計學方法
本次實驗過程中，以SPSS19、0統計學軟件對兩種檢測方法所涉及數據進行分析。其中計數的資料用n(%)表示，數據的組間比較以χ2進行檢驗;計量資料用均數±標準差(χ±s)表示，數據的.組間比較以T進行檢驗，P<0、05為統計學差異顯著的判定標準。
二、結果
LAMP檢測方法的陽性率為11、27%，分離培養法的陽性率為4、23%，數據組間比較差異明顯，即P<0、05，詳情見表1：
三、討論
由各種類型沙門菌引發不同形式的野生禽獸、家畜以及人體感染，被統稱為沙門菌病。帶菌者，或是感染沙門菌人的糞便會在一定程度上污染食物，導致人體食物中毒。沙門菌極易導致人體發生細菌性食物中毒，主要表現有敗血癥、腸胃炎以及腸傷寒等，而且具有一定的傳染性，可以通過消化道致病。LAMP檢測法是新興恒溫核酸擴增法，根據靶基因所具有的6個區域，設計出來4種特異引物，通過特定鏈對DNA聚合酶進行置換處理，然后將其置于恒溫條件下45min左右，促使其產生擴增反應。相對比PCR而言，LAMP在模板方面并不存在紫外觀察、電泳、溫度循環以及熱變性等要求，不僅簡單快捷，具有非常強的特異性，而且檢測范圍相對較大，檢測靈敏度較好，在實際應用過程中，不需要借助特定儀器設備，便可以實現現場快捷且高通量檢測，成本較低，經濟性能顯著。
細菌分離培養法操作程序較為復雜，檢測速度比較緩慢，基本上，需要檢測7d后，才能獲取陽性結果，而且分離細菌后，還要UI器進行增菌與再分離培養，生化鑒定過程中繁瑣，且成本較高，難以實現普及。LAMP可以直接提取前增菌液內的核酸，60min中便可以完成對其的擴增操作，沙門菌屬檢出時間不會超過24h，效率非常高。不僅如此，應用該方法可以通過肉眼直接觀察檢測結果，具有非常顯著的直觀價值與便捷性。
通過本次實驗可知，LAMP檢測法與分離培養法檢測結果的陽性率差異非常顯著，LAMP檢測陽性率為11、27%，分離培養法檢測的陽性率為4、23%，數據比較P<0、05，統計學意義顯著。
四、結語
應用LAMP法對食品進行檢測，不僅具有較高的沙門菌屬陽性率，而且檢測周期較短，實際應用價值顯著，值得廣泛推廣。
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