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紙片法與培養(yǎng)發(fā)酵法檢測大腸菌群結(jié)果對(duì)比分析
關(guān)鍵詞：紙片法;大腸菌群;靈敏度;特異度摘要:目的 探討改進(jìn)紙片法檢測大腸菌群的判斷標(biāo)準(zhǔn)。 方法 對(duì)紙片法檢測大腸菌群的紙片反應(yīng)結(jié)果狀況進(jìn)行詳細(xì)記錄后，將紙片以無菌操作轉(zhuǎn)入單料乳糖膽鹽發(fā)酵管中，用發(fā)酵法來證實(shí)其大腸菌群的陰陽性結(jié)果，再作分析。 結(jié)果 按GB14934-94判斷紙片法大腸菌群的陰陽性，其靈敏度為73.3%，特異度為99.2%;若按作者提出的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判斷，其靈敏度為97.9%，特異度為90.3%。二者比較靈敏度有顯著性差異（P<0.05）。消毒劑的殘留可能是導(dǎo)致紙片法結(jié)果判斷出偏差的主要原因。 結(jié)論 據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，建議改進(jìn)和完善紙片法大腸菌群的判斷標(biāo)準(zhǔn)，以更準(zhǔn)確地反映大腸菌群檢出的真實(shí)情況。
關(guān)鍵詞:紙片法;大腸菌群;靈敏度;特異度
Comparison of results of slip method with culture ferment method in detection of E.coli.
Abstract:Objective To compare the slip method with culture ferment method in the detection of E.coli and for improving the accuracy of judgment of detection results. Methods Slip method was used for monitoring the contamination status of cooking uten-sils and the slips were put into lactose bile salts broth tubes for confirmation of the detection results by using ferment method.The re-sults were statistically analyzed. Results Based on the judgment standard of GB14934-94，the sensitivity and specificity of the slip method were73.3%and99.2%respectively.But the sensitivity and specificity were，based on the standard proposed by the author，97.9%and90.3%，respectively.The difference of the sensitivities was significant（P<0.05），and the main cause of dif-ference in judgment of the results was the residual of the disinfectant. Conclusion Thus it is suggested that the standard for judg-ment of results in detection of E.coli be modified so as to improve the accuracy of detection.
Key words:Slip method;E.coli;Specificity;Sensitivity
紙片法檢測大腸菌群（簡稱紙片法，下同），1994年被正式列入餐（飲）具消毒效果監(jiān)測的國家標(biāo)準(zhǔn) ［1］ （下稱國標(biāo)或GB）。隨后，紙片法被各級(jí)疾病控制中心衛(wèi)生廣泛使用，它以、方便、快捷等優(yōu)點(diǎn)給現(xiàn)場監(jiān)測帶來了極大的便利，不但節(jié)省了大量、物力，而且還擴(kuò)大監(jiān)測覆蓋面提供了技術(shù)保障。但在這幾年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)在紙片法的結(jié)果觀察中出現(xiàn)許多與國標(biāo)中明示的結(jié)果判斷不一致的情況。為此，于2004年1～6月間對(duì)江門市區(qū)餐具、茶具監(jiān)測的581份標(biāo)本采用紙片法和培養(yǎng)發(fā)酵法（下稱發(fā)酵法）進(jìn)行大腸菌群檢測平行對(duì)比實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將結(jié)果分析報(bào)告如下。
1 與方法
1.1 材料 大腸菌群紙片由深圳市博卡生物技術(shù)有限公司提供;乳糖膽鹽發(fā)酵液、乳糖復(fù)發(fā)酵液、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）和革蘭氏染液均由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)。以上培養(yǎng)基和試劑均在有效期內(nèi)使用。試驗(yàn)樣品包括碗、盤、筷、湯匙等餐具，均來源于我市各大中小型餐廳。
1.2 方法
1.2.1 紙片法 按GB14934-94 ［1］ 在現(xiàn)場以隨機(jī)抽取準(zhǔn)備使用的各類餐具兩件，每件貼紙片兩張，每張紙片面積25cm2（5cmⅩ5cm），用無菌生理鹽水濕潤大腸菌群檢測紙片后，立即貼于餐具內(nèi)側(cè)表面，筷子以5只為一件樣品，將筷子進(jìn)口端抹拭濕潤的紙片兩張30s后取下，置于無菌塑料袋內(nèi)，將采樣后的大腸菌群紙片置37℃24h后進(jìn)行觀察，按GB14934-94判斷結(jié)果，即紙片變黃并呈紅色斑點(diǎn)（A）或紙片變黃并片狀紅暈者（B）均為陽性;紙片呈紫藍(lán)色未變黃均為陰性，并詳細(xì)記錄結(jié)果。
1.2.2 發(fā)酵法 把所有培養(yǎng)后的紙片以無菌操作轉(zhuǎn)入裝有10ml乳糖膽鹽發(fā)酵液的試管中，置37℃24h，凡產(chǎn)酸產(chǎn)氣者轉(zhuǎn)種EMB，置37℃24h，對(duì)平板上可疑大腸菌群菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢為G-無芽胞桿菌，復(fù)發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣者判為大腸菌群陽性。
2 結(jié)果
2.1 紙片法與發(fā)酵法檢測餐具大腸菌群對(duì)比結(jié)果，見表1。
2.2 按現(xiàn)行國標(biāo)方法進(jìn)行判斷，表1中的A+B項(xiàng)均為大腸菌群陽性，其余判為陰性。A+B項(xiàng)經(jīng)發(fā)酵法證實(shí)陽性數(shù)為244（124+120），假陽性數(shù)為2;而C+D+E中證實(shí)真陰性數(shù)為246，假陰性數(shù)（即真陽性數(shù)）為89（23+59+7）。以發(fā)酵法為經(jīng)典標(biāo)準(zhǔn)法去檢驗(yàn)紙片法，則紙片法的靈敏度為73.3%［244/（244+89）］，特異度為99.2%［246/（246+2）］。紙片法的陽性實(shí)驗(yàn)預(yù)測值為99.2%［244/（244+2）］，陰性實(shí)驗(yàn)預(yù)測值為73.4%［246/（246+89）］。
表1 紙片法與發(fā)酵法檢測餐具大腸菌群結(jié)果對(duì)比（略）
2.3 若將A+B+C+D項(xiàng)均判為陽性，而只將E項(xiàng)判為陰性，則發(fā)酵法證實(shí)陽性數(shù)為326（124+120+23+59），假陽性數(shù)為24（126-124+81-59）;證實(shí)陰性數(shù)為224（231-7），假陰性數(shù)為7。那么紙片法靈敏度為97.9%［326/（326+7）］，特異度為90.3%［224/（224+24）］，陽性實(shí)驗(yàn)預(yù)測值為93.1%［326/（326+24）］，陰性實(shí)驗(yàn)預(yù)測值為97.0%［224/（224+7）］。
2.4 紙片法兩種判斷結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)比較 按現(xiàn)行國標(biāo)判斷結(jié)果與按作者提出以上“2.3”中的方法判斷結(jié)果相比較，經(jīng)χ 2 檢驗(yàn)，有顯著性差異（χ 2 =4.18，P<0.05），其特異度無顯著性差異（χ 2 =0.38，P>0.05），其陽性實(shí)驗(yàn)預(yù)測值無顯著性差異（χ 2 =0.19，P>0.05），其陰性試驗(yàn)預(yù)測值也無顯著性差異（χ 2 =3.18，P>0.05）。
�。� 討論
紙片法列入餐（飲）具消毒監(jiān)測的國標(biāo)后 ［1］ ，有很多人將紙片法與發(fā)酵法進(jìn)行了對(duì)比研究 ［2］ 。隨后又有人將其延伸到其它樣品的檢測中 ［3］ 。在這些研究中，其結(jié)果的判斷都沿用GB14934-94的判斷標(biāo)準(zhǔn)。在標(biāo)準(zhǔn)中共列出了3種紙片變化情形，即紙片保持紫藍(lán)色不變;紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn);紙片變黃并在黃色背景上呈現(xiàn)片狀紅暈。第一種情形判為大腸菌群陰性，后兩種情形判為陽性。而在實(shí)際工作中經(jīng)常會(huì)碰到這三種情形之外的反應(yīng)現(xiàn)象。即紙片未變黃，在紫藍(lán)色背景上呈現(xiàn)數(shù)個(gè)紅斑或片狀紅暈。當(dāng)遇到這些情形時(shí)，按國標(biāo)的判斷標(biāo)準(zhǔn)就無所適從，但也只好判為陰性。本文實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果分析認(rèn)為這些情形也應(yīng)判為陽性。
紙片法檢測餐（飲）具大腸菌群時(shí)，按國標(biāo)判斷結(jié)果時(shí)，其靈敏度僅73.3%，陰性試驗(yàn)預(yù)測值僅為73.4%，表明有大量大腸菌群陽性結(jié)果被遺漏。而按作者提出的標(biāo)準(zhǔn)判斷時(shí)，靈敏度可達(dá)到97.9%，陰性試驗(yàn)預(yù)測值可達(dá)到97.0%，與國標(biāo)法比較有很大的提高，二者存在顯著性差異。同時(shí)其特異度（90.3%）與國標(biāo)法（99.2%），比較沒有顯著性差異。提示采用作者提出的判斷標(biāo)準(zhǔn)能更準(zhǔn)確地反映客觀情況。
從理論上講，大腸菌群呈陽性時(shí)發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，pH下降，紙片應(yīng)變黃。而實(shí)踐中經(jīng)常碰到未變黃的情況，我們分析認(rèn)為可能是由于檢測樣品上殘留消毒劑的影響，也有人認(rèn)為 ［4］ 與紙片基質(zhì)偏堿有關(guān)，這有待進(jìn)一步研究證實(shí)。
參考文獻(xiàn):
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