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健兒厭食康顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究
摘要】目的 建立健兒厭食康顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 對麥芽、山藥、蓮子進(jìn)行定性鑒別。對顆粒劑中粒度、水分、溶化性、裝量差異進(jìn)行檢查，采用薄層掃描法測定顆粒劑中熊果酸含量。結(jié)果 熊果酸點(diǎn)樣量在0.66～3.30g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。同板精密度為1.3%異板精密度為2.6%。平均回收率為96.5% (RDS為1.6%)。結(jié)論 方法簡便可靠，可用于健兒厭食康顆粒的質(zhì)量控制。
【關(guān)鍵詞】熊果酸 薄層掃描法 質(zhì)量控制
健兒厭食康顆粒具有補(bǔ)脾益氣、消食健胃、增進(jìn)乳食之功效，主治脾胃氣虛型小兒厭食癥。主要由山藥、雞內(nèi)金、蓮子、山楂、六神曲、麥芽等10味中藥組成的制劑，臨床應(yīng)用四十余年，組方合理，療效確切，本文對健兒厭食康顆粒質(zhì)量控制方法進(jìn)行了研究，建立了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為本品新藥研發(fā)提供質(zhì)量控制方法。
1 儀器與試藥
CS- 930型雙波長薄層掃描儀(日本島津);健兒厭食康顆粒(遼寧中醫(yī)學(xué)院，批號(hào)021201、021202、021203、030301、030302);熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)742-9405，含量為99.7%);麥芽、山藥、蓮子(購自沈陽天益堂大藥房)硅膠G(青島海洋化工廠 200-300目);羧甲基纖維素鈉(沈陽試劑廠);氯仿、丙酮、無水乙醇等均為分析純
2 方法與結(jié)果
2.1 性狀：本品為顆粒劑，為黃棕色至棕色顆粒，味微苦。
2.2 鑒別
2.2.1 麥芽
取本品，置顯微鏡下觀察：稃片外表皮細(xì)胞黃色或淡黃色，縱列，常由一個(gè)長細(xì)胞與兩個(gè)細(xì)胞相間排列;長細(xì)胞壁較厚，波狀彎曲，木化;短細(xì)胞一大一小，大者內(nèi)含棕色物;可見單細(xì)胞或其脫落痕。
2.2.2 山藥
取本品10克，加無水乙醇30ml,回流提取1小時(shí)，濾過，濾液濃縮至2ml，加鹽酸0.5ml，加水20ml,置水浴上蒸干，放冷，殘?jiān)右颐?0ml溶解，濾過，濾液揮盡乙醚，殘?jiān)訜o水乙醇1ml溶解，作為供試品溶液。另取山藥粉末1g同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-丙酮(10：1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2.2.3 蓮子
取本品5g，加70%乙醇30ml，冷浸4小時(shí)，濾過，濾液作為供試品溶液。另取蓮子對照藥材0.1g，加70%乙醇1ml，冷浸4小時(shí)，濾過，濾液作為對照藥溶液。吸取上述兩種溶液各 4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-醋酸-水(4：0.5：4)上層液為展開劑，展開兩次，取出晾干，噴以α-萘酚試液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)。
2.3 檢查
2.3.1 粒度：取本品5批，照《中國藥典》(2005年版二部附錄IN顆粒劑項(xiàng)下的“粒度”檢查。[1]結(jié)果表明，本品不能通過一號(hào)篩和能通過五號(hào)篩的總和未超過供試量的15%，符合中國藥典有關(guān)規(guī)定。
2.3.2 水分：取本品3g，照水分測定法第一法(《中國藥典》2000年二部附錄Ⅷ M)測定顆粒劑的含水量，[2]結(jié)果表明，本品5批含水量均不大于5%，符合中國藥典有關(guān)規(guī)定。
2.3.3 溶化性：取本品5批，照《中國藥典》(2005年版二部附錄IN顆粒劑項(xiàng)下的“溶化性”檢查。結(jié)果表明，本品能夠混懸均勻，并未見有焦屑等異物。符合中國藥典有關(guān)規(guī)定。
2.3.4 裝量差異：取本品5批，每批10袋，照《中國藥典》(2005年版二部附錄IN顆粒劑項(xiàng)下的“裝量差異”方法檢查，結(jié)果表明，本品裝量差異均在±7%以內(nèi)，符合中國藥典有關(guān)規(guī)定。
2.4 薄層掃描法測定健兒厭食康顆粒山楂中的熊果酸含量
2.4.1 色譜條件
薄層板：取含0.2%羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G板，厚度0.3mm，室溫陰干，105℃活化30分鐘;展開劑：氯仿-丙酮-冰醋酸(18：2：0.2);展開方式：上行展開，展距12cm;顯色劑：10%硫酸無水乙醇溶液，顯色后105℃烘約5-10分鐘;薄層掃描測定參數(shù)：λS=520nm，λR=700nm，SX=3反射式鋸齒掃描。
2.4.2 溶液的制備
2.4.2.1 熊果酸對照品溶液的制備：
精密稱取熊果酸對照品適量，用無水乙醇配制成含熊果酸約0.6mg•mL-1的溶液，即得。
2.4.2.2 樣品溶液的制備：
取本品5g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)訜o水乙醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶內(nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.4.2.3 陰性對照液的制備：
取山藥(炒)、雞內(nèi)金(炒)、大棗、六神曲(炒)各1.5g，薏苡仁(炒)、蓮子、茯苓、麥芽(炒)、萊菔子(炒)各1g，置索氏提取器中，加乙醚適量，加熱回流提取4小時(shí)，提取液回收乙醚至干，殘?jiān)訜o水乙醇溶解，定量轉(zhuǎn)移至5ml量瓶內(nèi)，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
2.4.3 陰性干擾試驗(yàn)
精密吸取對照品溶液2uL與4uL，供試品與陰性液各6uL，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件展開，晾干，顯色測定，繪制薄層光譜圖。結(jié)果表明，對照品與供試品，可見光區(qū)內(nèi)吸收峰峰形、峰位完全相同，且在520nm波長處有最大吸收，陰性液在此波長下無干擾。在與對照品色譜相應(yīng)位置處，供試品具有相同位置的色譜峰，陰性液在此峰位無吸收。
2.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
精密稱取熊果酸對照品3.3mg，置5ml量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0uL，點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件測定，以進(jìn)樣量(ug)為橫坐標(biāo)，以色譜峰面積(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)回歸處理，得回歸方程為 Y=19606.4x-2771.8(r=0.9990)，表明熊果酸點(diǎn)樣量在0.66～3.30g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
2.4.5 精密度試驗(yàn)
取樣品5g，精密稱定，按2.4.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。
2.4.5.1 同板精密度試驗(yàn)
精密吸取同一供試品溶液6uL，在同一硅膠G薄層板上，重復(fù)點(diǎn)樣6次，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件展開，測定，結(jié)果表明同板精密度為1.3%。
2.4.5.2 異板精密度試驗(yàn)
精密吸取供試品溶液6uL、對照品溶液(0.4mg•mL-1)2uL與4uL，分別點(diǎn)予6塊硅膠G薄層板上，按 2.4.1項(xiàng)下色譜條件展開，測定，結(jié)果表明異板精密度為2.6%。
2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
取樣品5g(批號(hào)：021201)，精密稱定，按2.4.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液。將供試品溶液分別間隔不同時(shí)間測定，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，供試品溶液在2小時(shí)內(nèi)測定，熊果酸含量無變化。
Table 1 Result of stability test
2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn)
取樣品(批號(hào)為021201)6份，分別照2.4.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件展開，測定，結(jié)果見表2。
Table 2 result of repeating experiment 2.4.8 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取已知準(zhǔn)確含量的樣品(批號(hào)021201)5g，加入濃度為0.6mg•mL-1的對照品溶液2.0ml，按 2.4.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.4.1項(xiàng)下色譜條件展開，測定，結(jié)果表明平均回收率為 96.5%，RDS為1.6%。
2.4.9 含量測定
2.4.9.1 提取方法
根據(jù)待測組分熊果酸易溶于乙醚性質(zhì)，以乙醚為溶劑，分別采用直接回流提取法，索氏提取法、超聲提取法提取，結(jié)果見表3。根據(jù)測定結(jié)果，確立以索氏提取4小時(shí)為最佳提取方法。
Table 3 result of observing the pick-up method
2.4.9.2 樣品測定
取樣品10批，照2.4.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液和對照品溶液。吸取供試品溶液5μl，對照品溶液3μl與6μl，分別交叉點(diǎn)于同一含0.2%羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑的硅膠G薄層板上，以氯仿-丙酮-冰醋酸(18：2：0.2ml)為展開劑，置用展開劑飽和20分鐘的層析缸內(nèi)，展開，展距12cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在110℃烘至斑點(diǎn)顯色清晰取出，在薄層板覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，進(jìn)行薄層掃描，波長：λS=520nm，λR=700nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計(jì)算熊果酸含量，結(jié)果見表4。
Table 4 result of determining the content of ursolicocid (n=3)
3 討論
熊果酸為山楂中有機(jī)酸成分之一，經(jīng)參考有關(guān)文獻(xiàn)，擬以薄層掃描法測定本制劑中熊果酸含量，經(jīng)反復(fù)篩選溶劑系統(tǒng)，在現(xiàn)行色譜條件下，熊果酸與其他組分分離很好，陰性液無干擾，方法回收率為96.5%，方法學(xué)考察結(jié)果表明，精密度，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性均良好，可作為鍵兒厭食康顆粒劑中熊果酸含量測定方法。
參 考 文 獻(xiàn)
[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[Z].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:22.
[2]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[Z].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:193.
[3]衛(wèi)生部藥政局. 新藥(中藥)研究指南[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,1993.
[4]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典[M].上海:上�？萍汲霭嫔�,1977:170.
[5]曹春林.中藥藥劑學(xué)[M].上海:上�？茖W(xué)技術(shù)出版社,1986:217-227.
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