植物激素對(duì)附子多糖含量的影響
植物在生長(zhǎng)的過(guò)程中受到內(nèi)外源激素的調(diào)節(jié)作用，因此在植物的栽培過(guò)程中激素對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育、生理生化、產(chǎn)量、品質(zhì)、次生代謝產(chǎn)物等都可能會(huì)產(chǎn)生作用，下面是小編搜集整理的一篇探究植物激素對(duì)附子多糖影響的論文范文，歡迎閱讀了解。
【摘要】 目的研究植物激素對(duì)附子多糖含量的影響。方法在附子的苗期和子根膨大期噴施不同的激素，采用蒽酮-硫酸比色法測(cè)定多糖含量。結(jié)果不同的激素間差異明顯，赤霉素(GA)、α-萘乙酸(NAA)對(duì)多糖含量的增加也有作用;6-芐氨基嘌呤(6-BA)和6-糠氨基嘌呤(KT)對(duì)多糖含量的增加也有作用;吲哚乙酸(IAA)有抑制影響。結(jié)論植物激素對(duì)附子多糖的含量有顯著的影響。
【關(guān)鍵詞】 植物激素; 附子; 多糖
附子是我國(guó)常用的中藥，為毛茛科烏頭Aconitum carmichaeli Deb.的子根，附子的主要有效成分為烏頭類(lèi)生物堿:烏頭堿(aconitine)、中烏頭堿(mesaconitine) 與次烏頭堿(hypaconitine)等，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、強(qiáng)心、抗心律失常、降血糖等藥理作用, 有回陽(yáng)救逆、補(bǔ)火助陽(yáng)、散寒除濕的功效 [1，2]。中草藥多糖在增強(qiáng)機(jī)體免疫功能及抗腫瘤、抗肝炎、抗?jié)�、調(diào)血脂、降血糖、抗衰老方面都有作用[3]。附子多糖提取液還具有抗癌、抗衰老和增強(qiáng)免疫機(jī)能等作用[4]。附子多糖高效低毒的生物學(xué)特性,近年來(lái)逐漸受到了人們的關(guān)注，是人們新藥研發(fā)方向之一。植物激素作為化控技術(shù)在農(nóng)業(yè)上發(fā)揮了重要的作用,對(duì)藥用植物次生代謝產(chǎn)物也有影響，但在附子上的研究尚未開(kāi)展。因此，研究激素對(duì)多糖含量的影響，對(duì)附子的栽培管理、標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)和藥用價(jià)值的利用都有重要的意義。
1 材料與儀器
1.1 材料試驗(yàn)材料來(lái)自四川江油附子GAP基地的主要栽培種，由侯大斌教授鑒定。隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)，重復(fù)3次，種植在西南科技大學(xué)校內(nèi)實(shí)驗(yàn)田。試驗(yàn)田土壤特性：全氮含量為0.14%，速效氮含量為111.50 mg/kg，速效磷含量為32.785 mg/kg，速效鉀含量為89.29 mg/ kg,有機(jī)質(zhì)5.19 mg/kg。底肥：農(nóng)家肥30 000 kg/ha，油枯3 000 kg/ha，高效磷肥750 kg/ha，按附子生產(chǎn)要求進(jìn)行田間管理，每月除1次草。激素選用：GA(60 mg/L)，6-BA(40 mg/L)，NAA (30 mg/L)，IAA(20 mg/L)，KT (25 mg/L)，對(duì)照(清水)，分別在苗期和子根膨大期噴施，06-27收獲。
收獲附子先用自來(lái)水清洗干凈，在用蒸餾水漂洗兩次，裝入牛皮紙袋放入烘箱，在105℃下烘30 min，再在60～70℃下烘干至恒重，粉碎過(guò)60目篩，4℃冰箱保存，備用。
1.2 儀器設(shè)備、試劑旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi公司)，BP211D電子分析天平(Storis公司)，T6普析通用新世紀(jì)紫外分光光度計(jì)(北京普析)，高速冷凍離心機(jī)(Backman公司)，中藥切片機(jī)(長(zhǎng)沙中南制藥機(jī)械廠)、中草藥粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)。
無(wú)水乙醇，丙酮，乙醚，氯仿，正丁醇，濃硫酸，蒽酮，葡萄糖等，以上試劑均為分析純。
2 方法
2.1 附子多糖的提取[5，6]稱(chēng)取干燥的'附子粉200 g,加入適量80%乙醇,回流提取3 h,抽濾，藥渣揮盡乙醇后,沸水提取2次,1 h/次,合并提取液,濃縮至200 ml,加95% 乙醇使醇含量達(dá)到80% ,于4℃冰箱中醇沉過(guò)夜，離心(5 000 r/min，10 min)，沉淀依次用無(wú)水乙醇、丙酮洗滌,得到粗多糖。用熱水將粗多糖溶于水,用Sevage法(氯仿∶正丁醇=5∶1)除蛋白,重復(fù)3次(用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)得無(wú)蛋白為止)。流水透析后, 蒸發(fā)濃縮至200 ml, 加95%乙醇使醇含量達(dá)到80% ,于4℃冰箱中醇沉過(guò)夜。離心,沉淀依次用無(wú)水乙醇、丙酮洗滌,真空干燥，稱(chēng)重計(jì)算得率。
2.2 多糖含量的測(cè)定采用蒽酮-硫酸法[7]。以糖濃度(C，μg /L)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程A=0.005 2X-0.002 7,r=0.999 2，葡萄糖在20～100 μg/L與吸光度呈良好的線性關(guān)系。
2.3 換算因子的測(cè)定精密稱(chēng)取附子多糖100 mg,溶于1L容量瓶中,稀釋至刻度,搖勻。精密吸取1 ml于具塞試管中,按照蒽酮-硫酸法方法測(cè)定吸光度,根據(jù)回歸方程計(jì)算多糖濃度中葡萄糖的濃度C,按下式計(jì)算出換算因子f。f= C·D/W。式中W為多糖質(zhì)量(mg) , C為葡萄糖濃度(μg /ml) ,D為稀釋倍數(shù)。測(cè)得換算因子f= 4.83 ( n= 5,RSD=2.67%)。
2.4 樣品溶液的制備精密稱(chēng)取不同處理的附子樣品1.0 g(n=3)，加入150 ml 80 %乙醇回流提取3 h,抽濾，殘?jiān)鼡]盡乙醇后,用100 ml水提取1 h, 2次,離心，定容至250 ml的容量瓶中,為樣品液。
2.5 精確度實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取附子粉5份，每份1 g，按照“2.4”項(xiàng)下的方法同時(shí)制取5份樣品溶液。精密移取各樣品溶液各1 ml分別置于具塞試管中，按照“2.2”項(xiàng)下的方法測(cè)定吸光度，計(jì)算附子多糖含量。測(cè)得RSD=1.83%(n=5),說(shuō)明該分析方法精密度良好。
2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)按“2.4”項(xiàng)下樣品溶液制備方法制備，吸取1 ml試液于具塞試管中，按照“2.2”下的方法測(cè)定吸光度，每隔1 h測(cè)定1次，連續(xù)6 h，考察其穩(wěn)定性。測(cè)得吸光度在6 h內(nèi)無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性較好(RSD=1.70%)。
2.7 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)用SAS軟件進(jìn)行方差分析和最小顯著差數(shù)法(LSD)分析。
3 結(jié)果
3.1 精制多糖的得率干燥的附子粉200 g,得到精制多糖10.82 g,得率為5.41%(n=3)。
3.2 回收率的測(cè)定精密稱(chēng)取5份附子樣品液各1.0 g,分別加入30 mg左右的附子多糖,按照“2.4”項(xiàng)下樣品溶液的制備和“2.2”項(xiàng)下的測(cè)定方法操作,測(cè)得吸光度,計(jì)算回收率(R)�；厥章蔙=90.4%，RSD=1.58%(n=5)表1 回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.3 植物激素對(duì)附子多糖含量的影響精密吸取“2.5”項(xiàng)下樣品液1 ml于具塞試管中，按照蒽酮-硫酸法測(cè)定吸光度，按回歸方程計(jì)算樣品液中葡萄糖的濃度，按照下面公式計(jì)算附子粉中多糖的含量。樣品中含量(% ) = (CD /W Rf) ×100%。式中: C為樣品液中葡萄糖的濃度, D為稀釋倍數(shù), f為換算因子, W為樣品質(zhì)量,R為回收率。各處理樣品中多糖含量和方差分析表見(jiàn)表2。表2 方差分析表
激素對(duì)附子多糖的含量的影響見(jiàn)表3。區(qū)組間的方差分析可知，F(xiàn)=0.091F0.05,說(shuō)明不同的激素間差異具有明顯的差異性，多糖對(duì)不同激素的敏感性存在差異。GA，NAA對(duì)多糖含量的提高最為顯著，平均含量分別是37.00 ，36.40 mg/g，比對(duì)照增加了10.68%，8.88%，與其它激素和對(duì)照的差異達(dá)到極顯著;兩種細(xì)胞分裂素對(duì)多糖含量的影響也有顯著的增加，但作用低于GA,NAA，含量分別為35.02 mg/g和34.90 mg/g，增加量分別是4.76%，4.40%和對(duì)照的差異也達(dá)到極顯著。IAA對(duì)多糖含量有明顯的抑制作用，多糖含量?jī)H為32.13 mg/g。幾種激素的作用效果GA，NAA>KT，6-BA>CK>IAA。表3 激素對(duì)附子多糖含量影響分析
字母表示處理間的差異顯著水平，相同的字母表示兩處理間沒(méi)有差異，不同的字母表示兩處理間差異顯著，大寫(xiě)字母表示差異極顯著(1%)，小寫(xiě)字母表示差異顯著(5%)
4 討論
植物在生長(zhǎng)的過(guò)程中受到內(nèi)源激素(或外源激素)的調(diào)節(jié)作用，因此在植物的栽培過(guò)程中激素對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育、生理生化、產(chǎn)量、品質(zhì)、次生代謝產(chǎn)物等都可能會(huì)產(chǎn)生作用。多糖作為附子有效成分之一，是評(píng)價(jià)附子藥用價(jià)值的主要標(biāo)準(zhǔn)之一。目前對(duì)多糖含量的測(cè)定使用的方法還主要是經(jīng)典的紫外比色法，通過(guò)驗(yàn)證，該方法具有較好精密度和穩(wěn)定性，回收率也較高，是檢測(cè)多糖含量的優(yōu)良的方法之一。通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)，激素對(duì)多糖的含量有調(diào)節(jié)作用。除IAA外其它幾種激素對(duì)多糖含量都有明顯的增加作用，說(shuō)明IAA的作用具有不穩(wěn)定性，這與前人研究的激素IAA的調(diào)節(jié)作用具有不穩(wěn)定性比較相似[8]。IAA在植物生長(zhǎng)的不同時(shí)期易受到吲哚乙酸氧化酶的破壞而失去作用，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生有影響，可能是抑制多糖含量的原因之一。由于激素對(duì)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)機(jī)理目前還不是很清楚，激素對(duì)多糖含量的影響還有待進(jìn)一步研究。
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