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      2. 鏈球菌屬及其檢驗(yàn)

        時(shí)間:2023-10-25 06:33:55 賽賽 檢驗(yàn)技師/士 我要投稿
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        鏈球菌屬及其檢驗(yàn)

          鏈球菌屬(Streptococcus)細(xì)菌,呈鏈狀排列的革蘭陽(yáng)性球菌,個(gè)別種成雙排列。以下是小編整理的鏈球菌屬及其檢驗(yàn),希望對(duì)大家有所幫助。

          1、分類(lèi)

          鏈球菌的分類(lèi)方法尚未統(tǒng)一。常用下列兩種方法。

          ⑴根據(jù)溶血現(xiàn)象:分為3類(lèi)。

          ①甲型溶血性鏈球菌(α-hemolytic streptococcus):菌落周?chē)?~2mm寬的草綠色溶血環(huán),稱(chēng)甲型溶血或α溶血,該類(lèi)菌又稱(chēng)草綠色鏈球菌,為條件致病菌。

          ②乙型溶血性鏈球菌(β-hemolytic streptococcus):菌落周?chē)?~4mm寬的透明溶血環(huán),稱(chēng)乙型溶血或β溶血,該類(lèi)菌又稱(chēng)溶血性鏈球菌,致病性強(qiáng),常引起人和動(dòng)物多種疾病。

          ③丙型鏈球菌(γ-streptococcus):菌落周?chē)鸁o(wú)溶血環(huán),因而又稱(chēng)不溶血性鏈球菌,一般不致病。

          ⑵根據(jù)抗原結(jié)構(gòu):按鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原不同,可分成A、B、C、D …等20個(gè)群。同群鏈球菌間,因表面蛋白質(zhì)抗原不同又分若干型。如A群根據(jù)其M抗原不同,可分成約100個(gè)型;B群分4個(gè)型。對(duì)人致病的鏈球菌菌株,主要是 A群,多數(shù)呈現(xiàn)乙型溶血。

          2、細(xì)菌特性

          ⑴鏈球菌

          ① 形態(tài)染色 球形或橢圓形,直徑0.5~1.0μm,鏈狀排列,鏈的長(zhǎng)短與細(xì)菌的種類(lèi)和生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān),在液體培養(yǎng)基中形成的鏈較長(zhǎng)。無(wú)芽胞,無(wú)鞭毛。多數(shù)菌株在培養(yǎng)早期(2~4h)形成透明質(zhì)酸的莢膜。革蘭染色陽(yáng)性。

          ②分離培養(yǎng) 營(yíng)養(yǎng)要求較高,培養(yǎng)基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、維生素等物質(zhì)。多數(shù)菌株兼性厭氧,少數(shù)為專(zhuān)性厭氧。在液體培養(yǎng)基中呈沉淀生長(zhǎng),在血平板上,37℃18~24h后可形成灰白色、圓形、凸起、光滑、直徑為0.5mm~0.75mm的細(xì)小菌落,菌落周?chē)霈F(xiàn)不同類(lèi)型的溶血環(huán)。

          ③生化反應(yīng) 觸酶陰性、一般不分解菊糖,不被膽汁溶解,這兩特性可用來(lái)鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。

          ④抗原構(gòu)造 主要有三種:

          蛋白質(zhì)抗原:或稱(chēng)表面抗原。具型特異性有M、T、R、S 4種,位于C抗原外層。與致病性有關(guān)的是M抗原。

          多糖抗原:或稱(chēng)C抗原。為群特異性抗原,位于細(xì)胞壁。根據(jù)C抗原的不同,將鏈球菌分為20群。對(duì)人致病的90%屬A群。

          核蛋白抗原:或稱(chēng)P抗原。無(wú)特異性,為各種鏈球菌所共有,并與葡萄球菌有交叉。

          ⑤抵抗力 不強(qiáng),60℃30min即被殺死。對(duì)常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、四環(huán)素及磺胺類(lèi)敏感。

          ⑵ 肺炎鏈球菌

          ① 形態(tài)染色 革蘭陽(yáng)性球菌,菌體呈矛頭狀、成雙排列,寬端相對(duì),尖端向外,在膿液、痰液及肺組織病變中亦可呈短鏈狀,無(wú)鞭毛,無(wú)芽胞,在機(jī)體內(nèi)或含血清的培養(yǎng)基中可形成莢膜。

          ②分離培養(yǎng) 營(yíng)養(yǎng)要求高,在血平板上形成灰白色、圓形、直徑為0.5mm~1.0mm的扁平菌落,周?chē)胁菥G色溶血環(huán)。培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)時(shí)可產(chǎn)生自溶酶。

          ③生化反應(yīng) 多數(shù)菌株分解菊糖,膽鹽溶解試驗(yàn)陽(yáng)性和optochin敏感試驗(yàn)陽(yáng)性,籍此可與草綠色鏈球菌相區(qū)別。

          ④抗原結(jié)構(gòu)

          莢膜多糖抗原 可將肺炎鏈球菌分為85個(gè)血清型。肺炎鏈球菌14型與人類(lèi)A血型抗原有交叉反應(yīng)。

          多糖抗原 為各型菌株所共有。可被血清中一種C反應(yīng)蛋白(C reactive protein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP,急性炎癥者含量增高,故常以測(cè)定CRP作為診斷的依據(jù)。

          M蛋白:為型特異抗原,與A群鏈球菌M蛋白類(lèi)似,但抗原性不同,與毒力無(wú)關(guān)。

          ⑤抵抗力 本菌抵抗力弱,對(duì)一般消毒劑敏感。有莢膜菌株抗干燥力較強(qiáng),在干痰中可存活1~2月。對(duì)青霉素、紅霉素、潔霉素敏感。

          ⑥ 變異性 有莢膜的肺炎鏈球菌經(jīng)人工培養(yǎng)后可發(fā)生菌落由光滑型向粗糙型,即S-R變異,同時(shí)隨著莢膜的消失,毒力亦隨之減弱。將R型菌落的菌株接種動(dòng)物或在血清肉湯中培養(yǎng),則又可恢復(fù)S型。

          3、臨床意義

          ⑴化膿性鏈球菌

          A群鏈球菌也稱(chēng)化膿性鏈球菌(pyogenic streptococcus),致病力強(qiáng),占人類(lèi)鏈球菌感染的90%,能產(chǎn)生多種外毒素和侵襲性酶,如鏈球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶等,可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、軟組織感染、心內(nèi)膜炎、腦膜炎及變態(tài)反應(yīng)性疾病如急性腎小球腎炎、風(fēng)濕熱等,產(chǎn)毒株還可引起猩紅熱。鏈球菌型別多,各型間無(wú)交叉免疫,故常反復(fù)感染。

          ⑵乳鏈球菌

          B群鏈球菌學(xué)名無(wú)乳鏈球菌(S.agalactiae)是新生兒敗血癥和腦膜炎的常見(jiàn)菌,對(duì)成人主要引起腎盂腎炎、子宮內(nèi)膜炎等。

          ⑶ 肺炎鏈球菌

          肺炎鏈球菌(S.pneumoniae),俗稱(chēng)肺炎球菌(pneumococcus),是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌,還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎等。其莢膜在細(xì)菌的侵襲力上有重要作用,此外溶血素、神經(jīng)氨酸酶是主要致病物質(zhì)。感染后機(jī)體可產(chǎn)生牢固的型特異性免疫。但因菌型多,可再感染其他型。

          ⑷ 草綠色鏈球菌

          草綠色鏈球菌亦稱(chēng)甲型溶血性鏈球菌。是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群,可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。

          4、微生物學(xué)檢驗(yàn)

          ⑴標(biāo)本采集 根據(jù)不同疾病采集不同標(biāo)本。

          ⑵檢驗(yàn)方法

          顯微鏡檢查 標(biāo)本涂片革蘭染色,鏡檢見(jiàn)鏈狀排列革蘭陽(yáng)性球菌可初報(bào)。

          分離培養(yǎng) 血液標(biāo)本先增菌培養(yǎng),膿液、咽拭可接種血瓊脂平板并涂片染色鏡檢,初代分離需5%C02,35℃24h觀察菌落性狀。

          ⑵肺炎鏈球菌

          ①檢驗(yàn)程序

          ②標(biāo)本采集 根據(jù)病變部位采集不同標(biāo)本。

          ③檢驗(yàn)方法

          顯微鏡檢查: 除血液外,痰、膿液等均可直接涂片染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)革蘭陽(yáng)性矛頭狀雙球菌,周?chē)休^寬的透明區(qū),經(jīng)莢膜染色確認(rèn)后可初報(bào)“找到肺炎鏈球菌”。

          分離培養(yǎng):血液、腦脊液先增菌,可呈均勻混濁,有綠色熒光。痰液、膿液可直接接種血平板,5%~10%CO2培養(yǎng)后,取可疑菌落進(jìn)一步作optochin敏感實(shí)驗(yàn)、膽鹽溶菌試驗(yàn)與菊糖發(fā)酵試驗(yàn),以區(qū)別于甲型鏈球菌。

          動(dòng)物試驗(yàn):小鼠對(duì)肺炎鏈球菌敏感,12~36h死亡。

          莢膜腫脹試驗(yàn):如遇同型免疫血清,則肺炎鏈球菌莢膜出現(xiàn)腫脹,為陽(yáng)性。

          ④鑒定與鑒別

          ①Lancefield群特異性抗原鑒定:B群為無(wú)乳鏈球菌,F(xiàn)群為米勒鏈球菌,A、C、G群抗原不是種特異性抗原,還需根據(jù)菌落大小和生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定。

          ②PYR試驗(yàn):化膿性鏈球菌為陽(yáng)性。

          ③桿菌肽(bacitracin)敏感試驗(yàn):化膿性鏈球菌為陽(yáng)性,有別于其他PYR陽(yáng)性的β溶血性細(xì)菌(豬鏈球菌、海豚鏈球菌)和A群小菌落β溶血性鏈球菌(米勒鏈球菌)。此法可作為篩選試驗(yàn)。

          ④VP試驗(yàn):可鑒別A、C、G群β溶血的大、小兩種不同菌落。

          ⑤CAMP試驗(yàn):無(wú)乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子,它可促進(jìn)金黃色葡萄球菌溶血能力,使其產(chǎn)生顯著的協(xié)同溶血作用。試驗(yàn)時(shí)先將金黃色葡萄球菌(ATCC25923),沿直徑劃線(xiàn)接種,再沿該線(xiàn)垂直方向接種無(wú)乳鏈球菌,兩線(xiàn)不得相接,間隔約3~4mm。35℃孵育過(guò)夜,兩種劃線(xiàn)交界處出現(xiàn)箭頭狀溶血,即為陽(yáng)性反應(yīng)。本法可作為無(wú)乳鏈球菌的初步鑒定試驗(yàn)。

          性狀

          形態(tài)與染色

          革蘭染色陽(yáng)性,菌體呈球形或卵圓形,直徑0.6~1. 0μm,呈鏈狀排列。臨床標(biāo)本及固體培養(yǎng)基中以短鏈或成對(duì)多見(jiàn),液體培養(yǎng)基中呈長(zhǎng)鏈。無(wú)芽胞,無(wú)鞭毛,但有菌毛樣結(jié)構(gòu),多數(shù)菌株在培養(yǎng)早期可形成莢膜,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而消失。衰老、死亡或被吞噬細(xì)胞吞噬后革蘭染色可呈陰性。

          培養(yǎng)特性與生化反應(yīng)

          需氧或兼性厭氧。營(yíng)養(yǎng)要求較高,在含血液、血清、葡萄糖的培養(yǎng)基中才能生長(zhǎng)。最適生長(zhǎng)溫度為35℃,最適pH為7.4~7.6。在血清肉湯中易成長(zhǎng)鏈,管底呈絮狀沉淀。在血瓊脂平板上形成灰白色、表面光滑、凸起、邊緣整齊、直徑0.5~0. 75 mm的小菌落。不同菌株有不同的溶血現(xiàn)象。

          鏈球菌不產(chǎn)生觸酶,可與葡萄球菌相區(qū)別。鏈球菌不分解菊糖,不被膽汁溶解,這兩個(gè)特性常被用來(lái)鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。

          抗原構(gòu)造

          鏈球菌的抗原構(gòu)造復(fù)雜,主要有3種:

          ①核蛋白抗原(又稱(chēng)P抗原):無(wú)種特異性,各種鏈球菌均相同,可與葡萄球菌有交叉反應(yīng)。

          ②多糖抗原(又稱(chēng)C抗原):是細(xì)胞壁的多糖成分,有群特異性,是鏈球菌分群的依據(jù)。

          ③蛋白質(zhì)抗原(又稱(chēng)表面抗原):細(xì)胞壁外的菌毛樣結(jié)構(gòu)含M蛋白,位于C抗原外層,具有型特異性。M蛋白是化膿性鏈球菌的一種重要毒力因子,具有抗吞噬作用并與致病性有關(guān)。

          抵抗力

          鏈球菌抵抗力不強(qiáng),60℃ 30分鐘即被殺死,在干燥塵埃中可生存數(shù)月,對(duì)一般消毒劑敏感。乙型溶血性鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、四環(huán)素、桿菌肽及磺胺類(lèi)藥物等敏感。

          致病性

          A群鏈球菌

          A群鏈球菌也稱(chēng)為化膿性鏈球菌,是人類(lèi)鏈球菌感染最常見(jiàn)病原菌之一。

          1.致病物質(zhì)A群鏈球菌有較強(qiáng)的侵襲力,除胞壁成分外,可產(chǎn)生多種外毒素和胞外酶。

          (1)M蛋白 是A群鏈球菌的主要致病因子,含M蛋白鏈球菌具有抗吞噬和抵抗吞噬細(xì)胞內(nèi)殺菌作用的能力。此外,M蛋白與心肌、腎小球基底膜有共同抗原,能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體,引起交叉反應(yīng),損害人類(lèi)心血管等組織。在某些條件下,M蛋白與相應(yīng)抗體形成的免疫復(fù)合物可引起急性腎小球腎炎等超敏反應(yīng)。

          (2)鏈球菌溶血素由乙型溶血性鏈球菌產(chǎn)生,有兩種類(lèi)型:

          ①鏈球菌溶血素O(Streptolysin O,SLO):是一種含- SH基的蛋白質(zhì),對(duì)氧敏感,遇氧時(shí)- SH被氧化成- ss -基,失去溶血活性,若加入還原劑即可恢復(fù)溶血作用。SLO免疫原性強(qiáng),鏈球菌感染后2-3周至病愈后數(shù)月到一年內(nèi),85%~90%的患者血液中可出現(xiàn)抗SLO的抗體,風(fēng)濕熱尤其是活動(dòng)期患者該抗體顯著升高,其效價(jià)在1:400以上,可作為鏈球菌新近感染的重要參考指標(biāo)。

          ②鏈球菌溶血素S( streptolysin S,SLS):鏈球菌在血瓊脂平板上菌落周?chē)腂溶血環(huán)即SLS所致。SLS是小分子糖肽,無(wú)免疫原性,對(duì)氧不敏感。SLS對(duì)白細(xì)胞和多種組織細(xì)胞有破壞作用。

          (3)致熱外毒素(pyrogenic exotoxin) 又稱(chēng)紅疹毒素或猩紅熱毒素,是人類(lèi)猩紅熱的主要毒性物質(zhì),致熱外毒素抗原性強(qiáng),具有超抗原作用,對(duì)兔有致熱性和致死性。

          (4)侵襲性酶類(lèi) A群鏈球菌可產(chǎn)生多種侵襲性酶,均是擴(kuò)散因子,主要有三種。

          ①透明質(zhì)酸酶(hyaluromidase):能分解細(xì)胞間質(zhì)的透明質(zhì)酸,使細(xì)菌易在組織中擴(kuò)散。

          ②鏈激酶:( strepto - kinase,SK):又稱(chēng)鏈球菌纖維蛋白溶酶,與葡激酶相似,能使血漿中的纖維蛋白酶原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白酶,可溶解血塊或阻止血漿凝固,有利于細(xì)菌在組織中擴(kuò)散。③鏈道酶( streptodomase,SD):又稱(chēng)鏈球菌DNA酶。主要由A、C、G群鏈球菌產(chǎn)生。能分解膿液中高度黏稠的DNA,使膿液稀薄,促進(jìn)細(xì)菌擴(kuò)散。

          2.所致疾病鏈球菌可引起人類(lèi)多種疾患。A群鏈球菌引起的疾病約占人類(lèi)鏈球菌感染 的90%。感染來(lái)源是患者和帶菌者。感染方式途徑可通過(guò)空氣飛沫傳播,亦可經(jīng)皮膚傷口感染。

          (1)化膿性炎癥主要有淋巴管炎、淋巴結(jié)炎、蜂窩織炎、癰、膿皰瘡等局部皮膚和皮下組織感染,還可引起扁桃體炎、咽炎、咽峽炎、鼻竇炎、產(chǎn)褥感染、中耳炎、乳突炎等及其他系統(tǒng)的感染。

          (2)超敏反應(yīng)性疾病主要有急性腎小球腎炎和風(fēng)濕熱等。

          (3)中毒性疾病鏈球菌毒素休克綜合征、猩紅熱等。

          3.免疫性A群鏈球菌感染后,機(jī)體產(chǎn)生多種抗體,同型鏈球菌可使機(jī)體獲得特異性免疫力。鏈球菌型別較多,各型之間無(wú)交叉免疫力,所以機(jī)體可反復(fù)感染。患猩紅熱后可產(chǎn)生同型的致熱外毒素抗體,能建立牢固的同型抗毒素免疫。

          肺炎鏈球菌

          肺炎鏈球菌屬鏈球菌屬。廣泛分布于自然界,經(jīng)常寄居于正常人的鼻咽腔中,多數(shù)不致病,少數(shù)引起大葉性肺炎等疾病。

          1.抗原結(jié)構(gòu)與分型

          ①莢膜多糖抗原:存在于肺炎鏈球菌莢膜中。根據(jù)抗原不同,肺炎鏈球菌可分為90多個(gè)血清型,其中有20多個(gè)血清型可引起疾病。

          ②C多糖抗原:存在于肺炎鏈球菌細(xì)胞壁中,在鈣離子存在時(shí),可與血清中一種C反應(yīng)蛋白(Creartion protein,CRP)結(jié)合,故常用肺炎鏈球菌C多糖來(lái)測(cè)定C反應(yīng)蛋白,輔助診斷活動(dòng)性風(fēng)濕熱及急性炎癥性疾病。

          2.致病物質(zhì)本菌的致病物質(zhì)主要是莢膜莢膜有抗吞噬作用,失去莢膜,細(xì)菌就失去致病力。此外,肺炎鏈球菌溶血素O、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶是肺炎鏈球菌較重要的致病物質(zhì)。

          3.所致疾病該菌寄生在正常人的口腔及鼻咽腔,一般不致病,當(dāng)機(jī)體免疫力下降時(shí)才致病。肺炎鏈球菌主要引起大葉性肺炎,其次是支氣管炎肺炎后可繼發(fā)膿胸、胸膜炎,也可引起乳突炎、中耳炎、敗血癥和腦膜炎等。

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