青翹與老翹揮發油化學成分分析論文
摘要目的：研究與比較青翹和老翹中的揮發性成分。方法：采用水蒸氣蒸餾法提取揮發油。采用氣相-質譜聯用技術測定藥材中揮發油成分的含量。色譜條件：色譜柱為HP-5MS，進樣口溫度為200℃，載氣為氮氣，分流比為20∶1，程序升溫，流速為1ml/min，進樣量為1l；質譜條件：離子源為電轟擊離子源，電子能量為70eV，接口溫度為280℃，離子源溫度為230℃，四極桿溫度為150℃，電子倍增電壓為2300V，質量掃描范圍為29～350amu。結果：揮發油提取得率高低順序為青翹心＞青翹＞青翹殼＞老翹；青翹、老翹揮發油有18個共有峰，均以β-蒎烯含量最高，其次為α-蒎烯、β-水芹烯、松油烯-4-醇、松油烯等；此外，4-亞甲基-1-環己酮、3-環己烯-1-甲醇、對異丙基苯甲醛、香樹烯、棕櫚酸、肉豆蔻醛6種成分僅老翹揮發油中可檢出；而α-水芹烯、羅勒烯、α-松油醇、α-松香芹酮、Z-薄荷醇、乙酸龍腦酯、α-庫比烯、大根香葉烯D8種成分僅在青翹揮發油中檢出。結論：青翹與老翹揮發油的主要化學成分基本一致，但也存在一定差異，該發現或許能夠為連翹藥效差異物質基礎的研究提供一定依據。
關鍵詞：青翹；老翹；揮發油；氣相色譜-質譜聯用技術；成分分析
連翹為木犀科屬植物連翹Forsythiasuspensa（Thunb.）Vahl的干燥果實，主產于山西、陜西、河南、山東等地，具有清熱解毒、消腫散結之功效，主治溫熱、丹毒、斑疹、瘡瘍腫毒、瘰疬等證[1]。根據采收時間的不同，連翹通常分為青翹和老翹，秋季果實初熟尚帶綠色時采收的為青翹，除去雜質，蒸熟，曬干而成；老翹為果實熟透時采收，除去雜質，曬干而成[1]。揮發油類成分作為其主要有效成分之一，在以往的文獻報道中，大都是研究連翹揮發油的化學成分和藥理作用，并認為連翹揮發油具有顯著而穩定的抗菌、抗病毒作用[2]。而關于青翹和老翹揮發油化學成分之間的差異尚未見報道。因此，筆者嘗試采用氣相色譜-質譜聯用技術（GC-MS）對其揮發油成分進行分析，以期為青翹和老翹的藥效差異物質基礎的研究提供一定依據。
1材料
1.1儀器6890GC-5973MS型GC-MS儀（美國Agilent公司）；DV215CD型電子分析天平（美國Ohaus公司）；全玻璃揮發油提取器（天津玻璃儀器廠）；DFY-600C型萬能粉碎機（上海比朗儀器制造有限公司）。1.2試劑三氯甲烷、無水硫酸鈉均為分析純，水為純化水。1.3飲片青翹和老翹（亳州成源中藥飲片有限公司，批號均為20140703、150103；山西振東制藥有限公司，批號均為20141208。產地均為山西）經山西省中醫藥研究院倪艷主任藥師鑒定為真品。
2方法與結果
2.1揮發油的提取分別稱取一定量樣品，粉碎過1號篩，置于圓底燒瓶中，連接揮發油提取裝置，參照2015年版《中國藥典》四部“揮發油測定法”甲法提取揮發油[3]。待冷卻分層后，收集揮發油，用無水硫酸鈉脫水干燥，備用。2.2試驗條件[4]2.2.1色譜條件色譜柱：HP-5MS（30m×0.25mm×0.25m）；進樣口溫度：200℃；載氣：氮氣；分流比：20∶1；程序升溫：50℃（保持3min），5℃/min升至120℃（保持5min），10℃/min升至230℃（保持10min）；流速：1ml/min；進樣量：1l。2.2.2質譜條件離子源：電轟擊離子源；電子能量：70eV；接口溫度：280℃；離子源溫度：230℃；四極桿溫度：150℃；電子倍增電壓（EMV）：2300V；質量掃描范圍：29～350amu。總離子流見圖1。2.3供試品溶液的制備精密量取“2.1”項下適量揮發油，用三氯甲烷稀釋并定容至量瓶中，制成體積分數為1％的溶液。臨用前用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。2.4精密度試驗取“2.3”項下供試品溶液適量，按“2.1”項下試驗條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果，占最大峰面積5％以上的各峰面積比值無明顯差異，RSD＝4.42％（n＝6），表明儀器精密度良好。2.5穩定性試驗取“2.3”項下供試品溶液（批號：20140703）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24h時進樣測定，記錄峰面積。結果，占最大峰面積5％以上的各峰面積比值無明顯差異，RSD＝4.75％（n＝6），表明供試品溶液在24h內基本穩定。2.6重復性試驗精密稱取同一批樣品（批號：20140703）適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，記錄峰面積。結果，占最大峰面積5％以上的各峰面積比值無明顯差異，RSD＝4.86％（n＝6），表明本方法重復性良好。2.7樣品相對含量測定取樣品各適量，分別按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下試驗條件進樣測定，對各峰進行峰純度檢查，經人工解析及NIST02標準譜庫檢索定性，采用峰面積歸一化法定量分析，計算出各成分的相對含量，結果見表1、表2。由表1、表2可知，青翹、老翹、青翹殼、青翹心揮發油中分別有29、29、28、26種成分，扣除相對含量過低、碎片不完整、匹配度低于85％的峰，青翹、老翹、青翹殼、青翹心揮發油分別確定出26、24、24、21種成分，分別占各自揮發油總量的98.86％、98.16％、98.67％、98.02％。其中青翹與老翹揮發油有18個共有峰，分別為β-蒎烯、β-水芹烯、α-蒎烯、松油烯-4-醇、γ-松油烯、α-崖柏烯、α-松油烯、α-松油醇、鄰異丙基甲苯、月桂烯、莰烯、異松油烯、桉葉油醇、龍腦、桃金娘醇、δ-蓽橙茄烯、綠油腦、鄰苯二甲酸二丁酯，約占揮發油總量的95.76％。比董梅娟等[4]發現的12個共有峰增加了6個，與文獻報道的主成分基本一致[5-6]。青翹與老翹揮發油除了上述共有峰外，二者還存在一定差異，4-亞甲基-1-環己酮、3-環己烯-1-甲醇、對異丙基苯甲醛、香樹烯、棕櫚酸、肉豆蔻醛6種成分僅在老翹揮發油中檢出，分別約占揮發油總量的1.28％、0.45％、0.50％、0.36％、0.67％、0.25％；而α-水芹烯、羅勒烯、β-松油醇、α-松香芹酮、Z-薄荷醇、乙酸龍腦酯、α-庫比烯、大根香葉烯D8種成分則只在青翹揮發油中檢出，分別約占揮發油總量的0.24％、0.09％、0.13％、0.21％、0.10％、0.07％、0.10％、0.10％。其中，青翹揮發油中的α-水芹烯、α-松香芹酮和Z-薄荷醇存在于青翹殼和青翹心揮發油中，羅勒烯只存在于青翹心揮發油中。
3討論
筆者通過對山西產青翹和老翹各3批樣品揮發油化學成分的比較研究發現，青翹與老翹揮發油在主成分上很相似，均以倍半萜烯類及其含氧衍生物居多，這與魏希穎等[7]報道的主要成分為β-蒎烯（47.78％）、β-水芹烯（14.91％）、α-蒎烯（14.02％）、β-傘花烴（2.18％）、D-樅油烯（1.83％）、α-崖柏烯（1.75％）、β-月桂烯（1.13％）等基本一致。但是，老翹揮發油中存在少量的4-亞甲基-1-環己酮、3-環己烯-1-甲醇、對異丙基苯甲醛、香樹烯、棕櫚酸、肉豆蔻醛等；青翹揮發油中則存在α-水芹烯、羅勒烯、β-松油醇、α-松香芹酮、順式-薄荷醇、乙酸龍腦酯、α-庫比烯、大根香葉烯D等；同時從總離子流程圖上可以看出青翹與老翹揮發油的含量及各成分之間的比例也有所不同，說明由于采收時間的不同，青翹與老翹揮發油的積累上存在一定的'差異。同時，對于青翹揮發油中的差異成分究竟存在于青翹殼還是青翹心揮發油中，筆者也做了初步研究。結果發現，α-水芹烯、松香芹酮和Z-薄荷醇于青翹殼和青翹心揮發油中均存在，羅勒烯只存在于青翹心揮發油中，3-環己烯-1-甲醇、β-水芹烯、龍腦、綠油腦、鄰苯二甲酸二丁酯成分只存在于青翹殼揮發油中。至于在青翹心揮發油中發現的檜烯以及在青翹殼和青翹心中均未檢出的β-松油醇、乙酸龍腦酯、α-庫比烯和大根香葉烯D，可能是由于其本身量較少或者是結構發生變化所致。此外，青翹與老翹揮發油在得率和色澤方面也存在一定差異。由試驗結果可知，揮發油得率高低順序為青翹心（5.0％）＞青翹（2.3％）＞青翹殼（0.2％）＞老翹（0.1％），可以看出青翹揮發油的得率約為老翹的23倍，青翹心揮發油的得率約為青翹殼揮發油的25倍，可見青翹揮發油主要來源于其青翹心，這與郝旭亮等[8]報道的連翹揮發油類成分主要存在于連翹心中，含量在4％以上，水蒸氣蒸餾法提取的青翹出油率為2.4％基本相符。而在色澤上，青翹揮發油呈淺黃色，老翹揮發油呈橙黃色，青翹殼揮發油呈黃色，青翹心揮發油呈透明的微黃色接近無色，究其原因可能與其化學成分存在差異或某些成分受熱被氧化有關，這與周德英等[9]報道的采用超臨界萃取技術得到的青翹出油率為2.89％，老翹出油率為3.97％，青翹揮發油呈幾乎無色油狀物，老翹揮發油呈淺黃色油狀物不符，結合其他文獻懷疑其準確性。綜上所述，青翹與老翹揮發油的主要化學成分基本一致，但也存在一定的差異，且共有成分的含量及各成分之間的比例也有所不同，該發現或許能夠為連翹藥效差異物質基礎的研究提供部分依據。由于本結論僅在該試驗條件下通過山西產的3批樣品分析得出，對于其他產地的連翹藥材是否適用，還有待進一步研究。
參考文獻
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[2]魏希穎，周曉霞，馬海波.連翹種子揮發油抑制真菌及在豬油脂酸敗過程中的作用[J].天然產物研究與開發，2005，17（5）：625.
[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫藥科技出版社，2015：203.
[4]董梅娟，李媛媛，王瑞明，等.山西連翹揮發油氣相色譜-質譜特征圖譜研究[J].中國醫院藥學雜志，2011，31（5）：355.
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[7]魏希穎，徐慧嫻，楊小軍，等.連翹種子油GC-MS分析及抗氧化活性研究[J].陜西師范大學學報：自然科學版，2010，38（1）：71.
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