EDTA-K2抗凝劑引起血小板減少的結果探討

EDTA-K2抗凝劑引起血小板減少的結果探討

【摘要】目的　探討 EDTA 鹽作為抗凝劑的抗凝血在全自動血液分析儀檢測時發生血小板假性減少的原因。方法  使用 EDTA 鹽和肝素鋰作為抗凝劑的抗凝血和手工采指血 20μL，同時制作血涂片一張，通過人工鏡檢對照。結果  通過對3種方法對血小板測定結果對比分析。結論  EDTA抗凝劑引起血小板聚集，造成血小板計數假性減少。
【關鍵詞】乙二胺四乙酸二鉀 血小板假性減少
        在血細胞計數儀問世以后,檢測各種血細胞參數快速、準確，給臨床疾病的診斷及治療提供了有診斷價值的數據。乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)作為國際血液學標準化委員會認定的對血細胞影響較小的血液抗凝劑,在臨床檢驗工作中被廣泛應用。但乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)作為抗凝劑的抗凝血全自動血液分析儀上檢測時引起血小板假性減少的現象[1-2]，在臨床上少見，如果不能及時診斷和鑒別血小板減少是否乙二胺四乙酸二鉀有關，會導致臨床醫師為診斷明確疾病而給患者增加其他檢查，甚至導致患者的誤診誤治。因此，探討EDTA-K2抗凝劑對假性血小板減少的影響并探討其解決方法，有著極其重要的意義，為此，筆者對2008年1月～2011年9月在我科遇見的30例乙二胺四乙酸二鉀引起血小板假性減少的病例進行分析，先將結果總結如下。
        1 材料與方法
        1.1  血液來源 
        所有血液標本均來自于我院住院及門診病人，其中5份血液樣本來自糖尿病患者，6份血液樣本來自高血壓患者，6份血液樣本來自腦梗死患者，4份血液樣本來自高脂血癥患者，4份血液樣本來自慢性腎炎患者，5血液樣本來自肝炎患者。共30例，其中男性21例，女性9例，所有患者均無紫癜和出血傾向。
        1.2  儀器和試劑 
        檢測儀器采用Sysmex公司出產的型號為XE2100全自動血細胞分析儀及原廠配套試劑;德國ZEISS顯微鏡;EDTA-K2抗凝管,肝素鋰抗凝管均由美國BD公司提供。
        1.3  儀器法 
        分別將抽取的靜脈血2ML置于EDTA-K2和肝素鋰抗凝管，用SysmexXE2100血細胞分析儀測定血小板3次，結果取均值。
        1.4  手工法 
        采集患者新鮮指血20μL，稀釋后按《全國臨床檢驗操作規程》第3版由我科3位檢驗人員進行計數，結果取血小板均值。
        1.5 瑞氏染色
        分別將新鮮指血、EDTA-K2和肝素鋰抗凝血制作成血涂片，每種血液均制作血涂片1張，做瑞氏染色，在顯微鏡下鏡檢觀察。
        2  結果
        2.1  EDTA鹽和肝素鋰抗凝血和手工采指血血小板結果比較  見表1、2。
        表1  EDTA鹽和肝素鋰抗凝血和手工采指血血小板結果比較 
        
         
        制作的血涂片經瑞氏染色后鏡檢觀察發現，EDTA鹽血涂片中可見大量血小板聚集，肝素鋰作為抗凝劑的血涂片和手工采指血的血涂片中血小板散在分布。        3  討論
        以上30例患者中，使用SysmexXE2100血細胞分析儀測定EDTA鹽作為抗凝劑的抗凝血顯示血小板顯著減少，再用該血液樣本制作血涂片在顯微鏡下觀察見血小板聚集現象非常嚴重，而使用SysmexXE2100血細胞分析儀測定用肝素鋰作為抗凝劑的抗凝血顯示血小板數正常，同時手工采指血計數血小板數也正常，所有患者均無紫癜和出血傾向，血漿凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)均在參考值范圍之內，這提示：EDTA鹽作為抗凝劑的抗凝血可出現假性血小板減少。
        EDTA-K2常被作為靜脈血液樣本進行血常規測定的最適宜抗凝劑, EDTA鹽作為抗凝劑其原理是EDTA鹽與血液中的凝血因子IV（鈣離子）結合成螯合物，而使得其失去凝血作用，阻止靜脈血液凝固，故對血細胞形態影響很小，適用于全血細胞分析，但它偶爾會導致血小板聚集，從而引起血小板假性減少[3]。到目前為止,EDTA鹽作為抗凝劑引起血小板計數假性減少的發病機制并不是很清楚，可能與患者的基因或者染色體異常遺傳有關，也可能由于患者血漿中存在血小板抗體或者自身抗體有關，此現象并沒有病理和生理意義。但是也有可能與EDTA導致患者血液中的血小板活化，因而改變血小板膜表面某種隱匿性抗原構象，與血漿中的自身抗體結合，從而激活PLA、AA、PLC、ADP及5-HT等活性物質，而這些被激活的活性物質又能活化血小板纖維蛋白原受體，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團，出現血小板大量聚集現象。這種EDTA依賴的冷抗血小板自身抗體直接作用于血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa上，同時，這種與血小板結合的自身抗體的Fc端可與單核細胞或淋巴細胞膜上Fc受體結合，出現衛星現象。另外，血小板聚集呈衛星現象也與血液樣本所在環境的室內溫度有關，環境的室內溫度越低，衛星現象越嚴重[4-5]。
        綜上所述，對于血液樣本檢測結果中血小板＜50×109/L紅細胞和白細胞數量基本正常，血漿凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、凝血酶時間(TT)均在參考值范圍之內，對于這類患者，我們應及時和臨床醫師進行溝通，了解患者的全身情況，在患者均無紫癜和出血傾向的情況下，及時制作血涂片進行染色，觀察患者血液中血小板是否有聚集現象，同時進行手工計數，避免因使用EDTA鹽作為抗凝劑造成血小板假性減少，從而采取過多的檢查和治療針對血小板減少，浪費大量的人力、物力，導致誤診誤治，甚至延誤患者的治療。
        血小板計數變化在血栓與出血性疾病的診斷與治療中有著重要的作用,在臨床檢驗工作中，我們發現        SysmexXE2100血細胞分析儀大多數情況下會提示抗凝劑所致血小板假性減少病例,但也有極少數情況下SysmexXE2100血細胞分析儀不提示血小板聚集現象。因此，在臨床檢驗科工作中，對于首次檢測血小板減低的血液樣本均應認真分析其血小板直方圖,看有無擬合曲線、翹尾現象或血小板聚集警告提示,并制作血涂片染色進行顯微鏡下觀察, 看有無血小板聚集成堆現象或血小板衛星現象,并再次采集患者血液樣本對檢測項目進行復查, 以免導致臨床誤診誤治,給患者及家屬帶來巨大的精神壓力和痛苦。
參 考 文 獻
[1] 劉春生,柳發虎,浦春,楊淳,張桂花.不同抗凝劑對血小板檢測結果的影響.檢驗醫學與臨床,2011,8(8):899-890.
[2] 劉振玲.6例EDTA-K2致假性血小板減少實驗分析.醫學理論與實踐,2011, 24(9):1062-1063.
[3] 盧曉燕,趙利鵬,徐萍. EDTA抗凝劑引起血小板計數假性減少的原因探討.中國醫藥指南,2010,8(34):272-273.
[4] 肖傳宇,侯文華. EDTA-K2抗凝劑引起血小板假性減少分析.實用醫學雜志,25(21): 3690-3691.
[5] 王平,周金,岳秀玲,王蘇平,吳靜. EDTA 抗凝劑導致的血小板減少分析.中國誤診學雜志,2010,10(31):7665.

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