中藥龍葵的有效化學(xué)成分的色譜分析
摘 要：本文具體探討了藥龍葵的有效化學(xué)成分的提取與色譜分析。
關(guān)鍵詞：中藥龍葵;茄胺;超聲波;色譜;職稱論文
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料
PHS-3C精密pH計(jì)(北京精密儀器有限公司);DZF-6050型真空干燥箱(北京三博科技有限公司);SENCO R型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(北京生物創(chuàng)新技術(shù)有限公司);AY120電子天平(日本島津有限公司);高效液相色譜儀(日本島津有限公司);甲醇、乙醇、氯仿均為分析純。
1.2 超聲波輔助提取
稱取龍葵樣品，用v[Hcl]：v(乙醇)1：4溶液潤(rùn)濕24h后，龍葵與乙醇按1g：lOmL加入乙醇，在常溫下采用超聲波提取兩次。過(guò)濾后合并濾液。濾液經(jīng)減壓蒸餾后得到黃綠色固體。用0.5mol/L的HCl溶解甾體類生物堿粗提物后，用氯仿萃取三次，去氯仿層，水相用NaOH溶液調(diào)節(jié)至pH為1O.5，用氯仿萃取三次，合并氯仿萃取液，蒸干后用甲醇溶解并定容至50mL，得到龍葵生物總堿的甲醇溶液。
1.3 茄胺的制備
將含生物總堿的甲醇溶液定量取出并減壓蒸干后，殘留物用40mLv[Hcl]：v(乙醇)1：1溶解，在100度下水解，水解后將溶液中乙醇蒸餾去除，余液用氯仿萃取三次，取酸水層。經(jīng)NaOH溶液調(diào)節(jié)至pH為1O.5后，用氯仿萃取三次，合并氯仿萃取液，蒸干并用甲醇溶解，定容至50mL，得到茄胺的甲醇溶液。
1.4 色譜分析
經(jīng)在紫外區(qū)全波段掃描確認(rèn)標(biāo)樣茄胺在210hm處有最大吸收峰，因此，選定210hm作為茄胺的檢測(cè)波長(zhǎng)。色譜條件乙腈：水為55：45(水相pH用磷酸調(diào)節(jié)至2.7)，流速為1.2mL/min。茄胺進(jìn)樣量20ug/mL-200 ug /mL時(shí)。進(jìn)樣量2(ug/mL)與峰面積之間呈良好的線性關(guān)系。
2 結(jié)果
2.1 提取效果
超聲波輔助提取中草藥有效成份具有快速、簡(jiǎn)易、提取效率高的特點(diǎn)。依據(jù)這個(gè)原則，本文選擇實(shí)驗(yàn)條件溫度為：25度，乙醇濃度為95%。在最佳的實(shí)驗(yàn)條件下，莖葉內(nèi)的茄胺的平均得率為0.42%，果實(shí)內(nèi)的茄胺平均得率3.22%。稱取3份龍葵果實(shí)樣品，進(jìn)行平行提取實(shí)驗(yàn)，計(jì)算茄胺產(chǎn)物的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)以及同批樣品的RSD值，結(jié)果表明，3個(gè)龍葵樣品提出的茄胺平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：2.53%，RSD值為：4.18%，證實(shí)提取工藝穩(wěn)定、可靠。
2.2色譜效果
本文選擇水解1h的甾體類生物堿樣品作為考查對(duì)象，在未添加磷酸的條件下，色譜峰峰形嚴(yán)重拖尾，隨著酸度的加強(qiáng)，峰形開始銳化，至pH2.7時(shí)，甾體類生物堿和茄胺已完全離子化.峰形尖銳，兩類色譜峰分離度高。
3 討論
結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的觀點(diǎn)和手段，在中草藥資源寶庫(kù)中、特別是從確有療效的中草藥中，尋找和開始具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗癌新藥不僅對(duì)促進(jìn)人類的健康，而且對(duì)推進(jìn)我國(guó)民族醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展和中藥現(xiàn)代化具有十分重要的意義。龍葵是一年生草本，全草含澳洲茄堿、澳洲茄明堿、澳洲茄邊堿等多種甾體類生物堿，它們的苷元主要為茄胺，生物堿含量以果實(shí)為最多，在未成熟的果實(shí)中含量最高，果實(shí)成熟后則消失。
龍葵含有豐富的藥用和保健價(jià)值成分，具有消炎、抗菌、降壓、抗癌等多種藥用功能，但到目前為止，龍葵的資源利用率仍然比較低，有關(guān)其活性成分研究的報(bào)導(dǎo)更是一片空白。上個(gè)世紀(jì)，有人采用國(guó)外提取茄屬植物的工藝，用薄層掃描色譜法測(cè)定了龍葵中茄堿的甙元茄胺的含量，發(fā)現(xiàn)龍葵果實(shí)中茄胺含量明顯高于全草含量，并在未成熟的青果實(shí)中發(fā)現(xiàn)茄胺含量甚至高達(dá)4.2%，但有關(guān)龍葵中總生物堿提取工藝及總含量的`快速測(cè)定方法尚未見報(bào)道。在本文結(jié)果顯示中，超聲波輔助醇提法提取龍葵甾體類生物堿具有操作簡(jiǎn)單、提取時(shí)間短的優(yōu)點(diǎn)。同時(shí)其重復(fù)性好、穩(wěn)定性與回收率高。
高效液相色譜近年來(lái)以其絕對(duì)優(yōu)勢(shì)廣泛用于生物堿的分離和鑒定，尤其是由非極性固定想和極性流動(dòng)相組成的反液相色譜系統(tǒng)(RP-HPLc)的應(yīng)用約占90%，非極性固定相主要是以硅膠為基質(zhì)的硅烷化反相鍵和相。本文研究并確定了高效液相色譜測(cè)定甾體類生物堿及其苷元茄胺的分析條件：紫外檢測(cè)波長(zhǎng)210hm。流動(dòng)相選擇乙腈：水為55：45(水相pH用磷酸調(diào)節(jié)至2.7)，進(jìn)行紫外、紅外、質(zhì)譜分析，證實(shí)其為龍葵甾體類生物堿的苷元茄胺。
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