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檢驗技師考點:酶活性測定
20世紀50年代以前大都使用固定時間法。這種方法是以酶催化反應的平均速度來計算酶的活性,現多已不用。50年代中期開始采用連續監測法。這種方法用自動生化分析儀上完成,可以測酶反應的初速度,其結果遠比固定時間法準確,在高濃度標本尤為明顯,但本法也受到反應時間,反應溫度,試劑等的影響,應加以注意。
1)定時法:
通過測定酶反應開始后某一時間段內(t1到t2)產物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法,稱為兩點法,其中t1往往取反應開始的時間。在酶反應一定時間后,往往通過加入強酸、強堿、蛋白沉淀劑等,使反應完全停止,所以也叫中止反應法。
2)連續監測法:
又稱為動力學法或速率法、連續反應法。在酶反應過程中,用儀器監測某一反應產物或底物濃度隨時間的變化所發生的改變,通過計算求出酶反應初速度。
3)平衡法:
通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法,又叫終點法。
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