天蒼顆粒質量標準研究

天蒼顆粒質量標準研究

　　摘要】目的 建立天蒼顆粒的質量標準。方法 采用薄層色譜法對方中當歸、白芷、天麻、蒼術進行定性鑒別;采用高效液相色譜法對方中的2，3，5，4′ -四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進行含量測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-水(13﹕87)為流動相，檢測波長為320nm。結果 通過薄層色譜可鑒別出方中成分。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量測定線性范圍為0.1132～1.132μg;平均回收率為99.60%;RSD值為1.2%。結論 定性鑒別和含量測定方法準確可行，重復性好，可有效地控制天蒼顆粒的質量。

　　【關鍵詞】天蒼顆粒 質量標準 2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷 高效液相色譜法

　　天蒼顆粒由制何首烏、當歸、白芷等藥組成，具有溫經散寒，除濕止痛，舒筋壯骨的功能。適用于跌打損傷、筋骨酸痛，各類關節炎、滑膜炎等各類骨病。但其質量標準并不完善，故需要深入研究。本文利用TLC法和HPLC法進行相應的標準研究，從而提高完善天蒼顆粒的質量標準。

　　1 儀器和試藥

　　LC- 10ATVP高效液相色譜儀(日本島津公司)，SPD-10AVP紫外檢測器(日本島津公司)，KQ-250DB型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);硅膠G薄層板(青島海洋化工廠);2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品(0844-200003)，當歸對照藥材 (120927-200411)，白芷對照藥材(120945-200707)，天麻對照藥材(120944-200006)，天麻素對照品 (110807-200205)，蒼術對照藥材(120970-200403)均購自中國藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純，水為純化水，其他所用試劑均為分析純。天蒼顆粒樣品(批號：20101101，20101102，20101103)。

　　2 薄層鑒別

　　2.1 當歸: 取本品5g，研細，加乙醚50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，濾液揮干，殘渣加乙醚1ml使溶解，另取當歸對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取缺失當歸的陰性樣品5g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照液。照薄層色譜法[1](中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(4﹕1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的熒光斑點，陰性對照無干擾。(見圖1)

　　2.2 天麻: 取本品5g，研細，加70%甲醇50ml，超聲處理30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加70%甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液。另取天麻對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。再取天麻素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。再取缺失天麻的陰性樣品5g，同供試品溶液的制備方法制成陰性對照液。照薄層色譜法[1](中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗，分別吸取上述供試品溶液和陰性對照溶液10μl，對照藥材及對照品溶液各5μl，點樣于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-甲醇-水(9：1：0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在 105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應位置上，有相同顏色斑點，陰性對照無干擾。(見圖2)

　　3 含量測定

　　3.1 色譜條件：色譜柱Agilent ODS Cl8(5m，150 mm×4.6mm);以乙腈-水(13﹕87)為流動相，檢測波長為320nm，柱溫 35℃，流速1.0ml/min，理論塔板數按2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰計算應不低于3000。

　　3.2 樣品的制備

　　3.2.1 對照品溶液的制備：取2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，置棕色瓶中加稀乙醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

　　3.2.2 供試品溶液的制備：取裝量差異下的本品內容物，混勻，取適量，研細，取約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱重，超聲處理(功率250W，頻率30KHz)30分鐘，取出，放冷，再稱定重量,用稀乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，濾液經微孔濾膜(0.45μm)濾過，慮液置棕色瓶中備用。

　　3.2.3 陰性對照溶液的制備取處方除何首烏的全部藥味，按成品工藝及供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。

　　3.3 系統適用性實驗

　　3.3.1 專屬性實驗：分別精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20μl，注入液相色譜儀，按上述色譜條件檢測，在待測成分保留時間處，陰性對照無其他成分干擾，結果表明，測定方法專屬性強，無干擾，結果見圖4。

　　3.3.2 線性關系考察：分別精密吸取對照品1、2、4、6、8、10μL溶液， 注入液相色譜儀中，測定色譜峰面積。以進樣量為橫坐標，色譜峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，經線性回歸，回歸方程為：Y=1248068X-5646.25，r=0.9998。2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷進樣量在0.1132～1.132μg范圍內，呈良好的線性關系。

　　3.3.3 精密度試驗：精密吸取對照品溶液，重復進樣，連續測定6次，記錄峰面積，RSD值2.13%，表明精密度良好，符合含量測定要求。

　　3.3.4 穩定性試驗：取同一份供試品溶液，分別在制備后0，2，6，12，24 h后依法測定連翹苷的峰面積，結果2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面積RSD為0.73% ，表明供試品溶液在24h內基本穩定。

　　3.3.5 重復性試驗：取同批樣品，依法平行制備6份，分別測定2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量，RSD值為1.03%，結果表明供試品制備方法重復性良好，符合含量測定要求。

　　3.3.6 回收率試驗：取已知含量的樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中再分別加入2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷對照品適量，按供試品溶液的制備項下操作，結果見表1。

　　表1 回收率試驗測定結果

　　3.3.7 樣品測定：分別精密吸取供試品溶液與對照液各10μl，注入液相色譜儀中，測定，即得。結果見表2

　　表2 三批樣品含量測定結果

　　4 討論

　　4.1 2，3，5，4′ -四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷為何首烏的主要有效成分，參考有關文獻 ，經研究對比，建立了2，3，5，4′-四羥基二苯乙烯-2-O- β-D-葡萄糖苷的含量測定法，經方法學驗證，本法重現性好、陰性對照無干擾，操作簡單，便于滿足工業化生產的需要，可有效控制本品的質量，為保證用藥的有效性提供技術支持。

　　4.2 色譜條件的選擇依據本文先后考察了甲醇-水、乙腈-甲醇-水，參照相關文獻[2-4]最后采用乙腈-水(13﹕87)作為流動相測定連翹苷的含量，檢測波長為320nm，流速為1ml/min。理論塔板數不低于3000，主峰與其他雜質峰分離度大于 1.5，符合要求。

　　參 考 文 獻

　　[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[s].北京：中國醫藥科技出版社，2010.

　　[2]陳彥清，張輝等.高效液相色普法測定潤燥通便合劑中二苯乙烯苷含量[J].中國健康月刊，2011，30(4):391

　　[3]謝國芳，高敏，張利等. HPLC測定定益腦寧片中二苯乙烯苷的含量[J].現代中醫藥，2010，30(4):86-87

　　[4]廖海民，胡正海，賀定翔.制首烏中二苯乙烯苷含量的HPLC測定[J].西北藥學雜志，2006，21(1)：3—4.

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