關于高良姜藥材中4種有效成分的含量測定
【摘要】 目的 建立評價高良姜藥材質量的含量測定方法。方法 采用DiamonsilTMC18柱(4.6 mm×200 mm，5 μm)，流動相為乙腈?0.2%磷酸溶液，梯度洗脫，流速1 mL/min，柱溫30 ℃，檢測波長為220 nm。結果：高良姜素、山柰素?4′?甲醚、5?羥基?7?(4?羥基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮、5?羥基?1,7?雙苯?3?庚酮的線性范圍分別為0.267～1.328 μg、0.103 4～0.517 μg、0.310 8～1.554 0 μg、0.247 3～1.236 μg，平均回收率分別為100.9%、97.0%、96.8%、99.0%，RSD值分別為1.7%、1.4%、1.8%、0.6%。結論 該方法準確、簡便，具有良好的重復性和穩定性，可用于高良姜藥材的質量控制。
【關鍵詞】 高良姜;高效液相色譜法;黃酮;庚烷;質量控制
Abstract:Objective To develop an HPLC method for characterizing the active constituents, namely, galangin, kaempferol?4?methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C, in Alpinia officinarum Hance. Method Samples were analyzed on an HPLC Diamonsil C18 column(200 mm×4.6 mm，5 μm) by using gradient elution of acetonitrile (A) and 0.2% aqueous phosphoric acid (B) at a flow rate of 1.0 mL·min-1.The diode?array detection was set at 220 nm. Results Galangin, kaempferol?4?methyl ether, diphenylheptane A and diphenylheptane C had good linearity over the ranges of 0.267-1.328，0.1034-0.517， 0.3108-1.554 and 0.2473-1.236 μg， respectively, and the average recoveries were 100.9%(RSD=1.7%)、97.0%(RSD=1.4%)，96.8% (RSD=1.8%) and 99.0%(RSD=0.6%)，respectively.ConclusionThe method is rapid，accurate and reproducible, which is helpful in the quality control of Alpinia officinarum Hance.
Key words:Alpinia officinarum Hance;HPLC;flavonoids;diarylheptanoids;quality evaluation
高良姜為姜科山姜屬植物高良姜Alpinia officinarum Hance的干燥根莖，其性熱味辛，歸脾、胃經,具溫胃散寒、消食止痛的功效，用于脘腹冷痛、胃寒嘔吐、噯氣吞酸等[1]。高良姜黃酮和庚烷均具有調節鈣離子釋放、抗氧化應激、抗炎、調節免疫、抗病原微生物、抑制平滑肌刺激收縮、鎮痛止嘔等藥理作用[2～5]。高良姜含有十多種黃酮類成分[6]和十多種二苯基庚烷類物質[7]，其中高良姜素、山柰素?4′?甲醚、5?羥基?7?(4?羥基?3?甲氧苯基)?1?苯?3?庚酮 (DPHA)、5?羥基?1,7?雙苯?3?庚酮 (DPHC)含量比較高，因此本文選擇這4個成分作為監控指標，采用HPLC法同時測定不同批號和來源的高良姜藥材中的以上的2種黃酮類成分和2種庚烷類成分的含量，為全面準確控制藥材質量提供了可行的依據。
1、儀器、試劑與材料
Waters2695/2996高效液相色譜儀，Empower工作站; BP210D型電子分析天平(德國Sartorius公司);高良姜素對照品、山柰素?4′?甲醚對照品、DPHA、DPHC對照品均為自制，經UV、NMR、MS確定化合物結構，以HPLC法按面積歸一化法計，質量分數>98.0%;乙腈(色譜純);超純水;高良姜藥材為各地收集的市售產品，經廣東藥學院中藥鑒定教研室王鳳云老師鑒定均為姜科植物高良姜的根莖。
2、方法與結果
2.1 溶液的制備
2.1.1 對照品溶液的制備
分別精密稱取高良姜素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHB、DPHC對照品，加甲醇制成每1 mL含1.068、0.414、1.243、0.248、0.989 mg的對照品儲備液。分別精密量取上述對照品儲備液各1 mL，置20 mL容量瓶中，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，制成對照品溶液。
2.1.2 供試品溶液的制備
取不同批號的高良姜藥材細粉約0.2 g，精密稱定，加甲醇約40 mL回流提取2 h，放冷，過濾，濾液加甲醇定容至50 mL。搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。
2.2 色譜條件
廣東藥學院學報，2008，24(5)第5期 陳平,等.高良姜藥材中4種有效成分的含量測定 色譜柱：Diamonsil TMC18色譜柱(200 mm×4.6 mm，5 μm);流動相：乙腈(A)?0.2%磷酸水(B)，梯度洗脫[0～30 min，A?B(39∶42);30～35 min，A?B(45∶55)]，檢測波長：220 nm;流速：1.0 mL/min;柱溫：30 ℃，進樣量：20 μL。
2. 3 系統適應性試驗
分別精密吸取對照品溶液及供試品溶液各20 μL注入液相色譜儀，計算理論板數及分離度，結果見表1、圖1、圖2。
2.4 線性關系的考察
分別精密吸取對照品溶液5、10、15、20、25 μL注入液相色譜儀，按“2.2”色譜條件測定，以峰面積積分值為縱坐標，對照品進樣量為橫坐標繪制標準曲線，結果見表1。表1 系統適應性試驗結果
成分線性方程r線性范圍/μg高良姜素Y=4.0×106 X+5.1×1040.999 80.267 0～1.328 0山柰素?4′?甲醚Y=4.0×106X+2.5×1040.999 90.103 4～0.517 0DPHAY=2.0×106X+2.0×1040.999 90.310 8～1.554 0DPHCY=8.2×105X+4.7×1030.999 40.247 3～1.236 0
2.5 重復性試驗
取高良姜藥材細粉(批號20080315)約0.2 g，精密稱定，共6份，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液后，按“2.2”色譜條件下測定各組分的含量，結果高良姜素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHC的RSD值(n=6)分別為0.92%、1.60%、0.45%、1.8%，表明方法重現性良好。
2.6 穩定性試驗
取供試品溶液(批號20080315)1份，分別間隔4、12、24、36、48 h進樣，連續測定2 d，計算含量，結果高良姜素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHC的RSD值(n=6)分別為0.71%、1.51%、1.7%、1.9%，表明供試品溶液在48 h內測定結果穩定。
2.7 加樣回收率試驗
取高良姜藥材粉末(批號20080315)約0.1 g，共6份，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入“2.1.1”項下的高良姜素、山柰素?4′?甲醚、DPHA、DPHC對照品儲備液溶液各1 mL，按“2.1.2”項下方法制備溶液，按“2.2”項色譜條件操作并計算，結果見表3。 表3 回收率試驗結果
2.8 樣品測定
對11批樣品按上述方法進行含量測定，以外標法計算高良姜中各成分的含量。結果見表4。表4 樣品中的4種成分的含量
3、討 論
3.1 提取方法的選擇
比較了超聲提取法、索氏提取法和回流提取法對藥材中各成分的提取效果，并對不同的提取條件進行優化，結果發現回流提取法對兩類成分的提取效果最好，操作簡單，因此選用回流提取法提取高良姜藥材制備供試品溶液。
3.2 測定波長的選擇
PAD檢測器全波長掃描發現，DPHA在220 nm和285 nm均有較大吸收峰，但是DPHC僅在220 nm處有最大吸收峰，高良姜素和山柰素?4′?甲醚在267 nm和360 nm處有較大吸收峰，在220 nm處也有末端吸收。所以選擇220 nm作為測定波長，在無PAD檢測器的條件下也可以應用該法，便于推廣。
3.3 色譜柱和流動相的選擇
比較了DiomonsilTM C18柱、WatersTM C18柱和XterrexTM C18柱3種色譜柱的保留行為，發現WatersTM C18柱保留時間過長，XterrexTM C18柱對黃酮類物質存在嚴重的拖尾現象，而DiomonsilTM C18柱適用范圍廣，分離效果好，保留時間相對較短，所以選擇DiomonsilTM C18柱。同時考察了甲醇?水、乙腈?水、乙腈?磷酸溶液、甲醇?磷酸溶液體系等，最終選用0.2%磷酸溶液?乙腈體系進行梯度洗脫，取得較好峰形和較高的理論塔板數，效果滿意。
3.4 指標成分的確定
7?(4′?羥基?3′?甲基苯基)?1?苯庚基?4?烯?3?酮(DPHB)是高良姜中二苯基庚烷類物質中的一種成分，藥理作用與DPHA和DPHC的藥理作用相似， 但因其含量較低，不作為考察指標，所以未進行該成分的方法學考察和藥材中的含量測定。
【參考文獻】
[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2005年版一部[S].北京：化學工業出版社，2005:212.
[2] BLONSKA M.Effects of ethanol extract of propolis (EEP) and its flavoneson inducible gene expression in J774A.1 macrophages[J]. Ethnopharmacol,2004,91:25-30.
[3] BOSIO K. In vitro activity of propolis against Streptococcus pyogenes[J]. Lett Appl Microbiol,2000,31:174-177.
[4] 呂瑋,蔣伶活.高良姜的化學成分及藥理作用[J].藥學專論，2006,15(3):19-20.
[5] 陳佃,何瑞，李彩君.高良姜鎮痛止嘔有效成分的研究[J].廣州中醫藥大學學報, 2001,18(3):240-242.
[6] 周漩,梁漢明，馮毅凡.高良姜薄層色譜特定(指紋)圖譜的研究[J].藥物分析雜志，2005，25(8)：916-919.
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