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樹(shù)突狀細(xì)胞免疫學(xué)論文
當(dāng)代，論文常用來(lái)指進(jìn)行各個(gè)學(xué)術(shù)領(lǐng)域的研究和描述學(xué)術(shù)研究成果的文章，簡(jiǎn)稱之為論文。它既是探討問(wèn)題進(jìn)行學(xué)術(shù)研究的一種手段，又是描述學(xué)術(shù)研究成果進(jìn)行學(xué)術(shù)交流的一種工具。下面就是小編整理的樹(shù)突狀細(xì)胞免疫學(xué)論文，一起來(lái)看一下吧。
樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）具有超強(qiáng)的抗原提呈能力，且能夠誘導(dǎo)初始 T 細(xì)胞活化，在免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)中具有重要作用[1].近年來(lái)，DC 疫苗在實(shí)驗(yàn)室中廣泛應(yīng)用于治療腫瘤的研究[2-3].探討 DC 2.4細(xì)胞疫苗在 MB 49 小鼠膀胱癌皮下移植瘤模型中的免疫學(xué)效應(yīng)。
1 材料
�。�1）DC 2.4、MB 49 細(xì)胞，受贈(zèng)于遼寧醫(yī)學(xué)院張佩教授。（2）C 57 BL/6 近交系雌性小鼠 36 只，8 ~ 12 周齡，體重 18 ~ 20 g,雌性，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證編號(hào)：SCXK（滬）2012-0005.（3）FITC anti-Mouse CD 4、PE anti-Mouse CD69 購(gòu)自美國(guó) BD 公司。Anti-CD 4、Anti-CD 8、Goat Anti-RabbitIgG/HRP 購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。
2 方法
2.1 小鼠膀胱癌 MB 49 細(xì)胞皮下移植瘤模型的建立將 36 只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為 3 組，疫苗組、PBS 對(duì)照組和正常對(duì)照組。用 PBS 調(diào)整對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 MB 49 細(xì)胞濃度至 5×106/ml,注射于各組小鼠右前腋皮下，每只 0.2 ml,建立 MB 49 細(xì)胞皮下移植瘤模型[4].
2.2 疫苗制備與接種凍融法制備 MB 49 粗提全抗原，按原細(xì)胞的比例 10:1 負(fù)載DC 2.4,制備 DC 2.4 疫苗。調(diào)整疫苗細(xì)胞濃度至 1×106/ml,各組小鼠分別于建模第 7 d、14 d 給予相應(yīng)治療：疫苗組給予疫苗 0.1ml + PBS 0.1 ml,PBS 對(duì)照組給予 PBS 0.2 ml,注射于小鼠接種瘤細(xì)胞處皮下。正常組正常飼養(yǎng)。
2.3 疫苗免疫學(xué)效應(yīng)檢測(cè)尼龍毛柱法分離各組小鼠脾 T 細(xì)胞，RPMI-1 640 調(diào)整細(xì)胞濃度至 1×107/ml.以 FITC-CD 4 和 PE-CD 69 雙標(biāo)；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T 細(xì)胞 CD 4、CD 69 表達(dá)。取分離的 T 淋巴細(xì)胞，PBS 調(diào)整細(xì)胞濃度為 5×107/ml,24 孔板，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48 h,取上清，ELISA法檢測(cè) IFN-γ 含量。石蠟包埋瘤組織切片，Envision 兩步法免疫組化染色。免疫組化圖像分析系統(tǒng)分析，計(jì)數(shù)CD 4+和CD 8+細(xì)胞數(shù)。
2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用 SPSS13.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
3.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)比較各組小鼠脾 CD 4+、CD 4+CD 69+T 細(xì)胞數(shù)流式檢測(cè)小鼠脾 CD 4+、CD 4+CD 69+T 細(xì)胞數(shù)，疫苗組均高于PBS 對(duì)照組和正常組，P < 0.01,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，（其中 1組P < 0.05），見(jiàn)表 1.各組取 1 張流式圖進(jìn)行比較，見(jiàn)圖 1.
3.2 ELISA 法檢測(cè)比較各組小鼠脾 T 細(xì)胞培養(yǎng)上清 IFN-γ 水平脾 T 細(xì)胞培養(yǎng)上清 IFN-γ 水平，疫苗組高于 PBS 對(duì)照組和正常組，P < 0.01,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表 2.
3.3 免疫組化檢測(cè)比較各組小鼠瘤組織 CD 4+、CD 8+細(xì)胞數(shù)免疫組化檢測(cè)小鼠瘤組織 CD 4+、CD 8+細(xì)胞數(shù)，疫苗組 CD4+和 CD 8+T 細(xì)胞數(shù)均高于 PBS 對(duì)照組，P < 0.01,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表 3.
4 討論
CD 69 是一個(gè)早期淋巴細(xì)胞活化的標(biāo)志，近年的研究表明[5],CD 69 抗原的表達(dá)在 T 細(xì)胞活化的過(guò)程中起重要作用。DC 2.4 疫苗刺激 T 細(xì)胞活化和增殖，使脾內(nèi) CD 4+、CD 4+CD 69+細(xì)胞數(shù)增加。DC 2.4 能通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子趨化 T 細(xì)胞，通過(guò)血管內(nèi)皮屏障而增加腫瘤部位的效應(yīng) T 細(xì)胞數(shù)量[6].CD 4+T 細(xì)胞在 IL-12 等細(xì)胞因子促進(jìn)下可極化為 Th 1 細(xì)胞，Th 1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-2、IFN-γ 等細(xì)胞因子，促進(jìn) Th 1 細(xì)胞、CTL 的增殖，從而放大免疫效應(yīng)。CD 8+CTL 通過(guò)溶細(xì)胞作用直接殺傷腫瘤細(xì)胞和通過(guò)分泌 IFN-γ、TNF 間接殺傷腫瘤細(xì)胞。[圖略]
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